穩定細胞株篩選的三種方法淺析

業內周知,混合穩定細胞株具有許多不同的穩定細胞株。因為穩定化的整合過程常常與失活的宿主內源基因的插入同時進行,穩定化的混合細胞株或比較多個單克隆穩定化的細胞株是實驗準確資料的基礎。由此,我們淺析常見的3種穩定細胞株篩選的發展情況。

穩定細胞株篩選的三種方法淺析穩定細胞株篩選的三種方法淺析

其一、96孔單克隆稀釋法篩選穩定細胞株

其二、單克隆環法篩選穩定細胞株

單克隆環法主要用於整合率低的轉染法以及獲得單克隆細胞株。單克隆環法具有工作量小的優點,只要把轉染體細胞按一定的細胞密度放入新的培養皿,用合適的藥物篩選並在培養皿中進行擴增,適合少量勞動力作業,其劣勢可能難以獲得高產率的穩定細胞株。

其三、逆轉錄病毒的混合克隆技術篩選穩定細胞株

此法可用於製備穩定混合細胞株,其優點在於能在短時間內得到穩定的細胞株,且能在任何時候將細胞稀釋成新的培養皿,傾向於整合靠近轉錄始端的位點的基因,容易啟用下游基因,但同時這些整合到轉錄活性基因的基因很容易導致整合部位基因的插入失效,影響到克隆的純度。高等細胞株中存在非整合細胞,這種混合細胞內的細胞穩定結合,不會失去生長的優勢。